INTRODUCCIÓ
El nostre objectiu és poder obserbar al microscopi òptic els
cromosomes que obtindrem d'una part del fetge de pollastre.
BASES TEÒRIQUES
L’extracció d’ADN d'un grup de cel·lules es basa en el fet
que els ions salins són atrets cap a les càrregues negatives de l’ADN,
permetent la seva dissolució i posterior extracció de la cèl·lula. Es comença
per lisar (trencar) les cèl·lules mitjançant un detergent (tensioactiu),
buidant-se el seu contingut molecular en una dissolució tampó en la que es
dissol l’ADN.. En aquest moment, el tampó conté l’ADN i tot un sortit de restes
moleculars: ARN, hidrats de carboni, proteïnes, i altres substàncies en menor
proporció. Les proteïnes associades a l’ADN, de gran longitud (histones i
altres), s’hauran fraccionat en cadenes més petites i separat d’ell per l’acció
del detergent. Només queda, per tant, extreure l’ADN d’aquesta barreja del
tampó, per la qual cosa s’utilitza l’acohol isoamílic.
MATERIAL
·
Mostra a analitzar (fetge de pollastre)
·
Aigua destil·lada
·
NaCl
·
NaHCO3
·
Detergent
·
Alcohol isoamílic a 0ºC (3-metil 1-butanol) (isopentanol)
·
Batidora
·
Nevera
·
Colador i embut
·
Vas de precipitats
·
Pipeta
·
Tubs d’assaig
·
Vareta de vidre
·
Tisores
PROCEDIMENT
1.
Preparem una dissolució tampó amb: 120 ml
d'aigua destil·lada, 1.5 g de NaCl, 5 g NaHCO3, 5 ml de
detergent
2.
Agafem un tros de fetge i el tallem a trossets
amb l'ajuda de les tisores.
3.
Afegim un dit d'aigua destilada i agafem la
batidora i ho triturem els trossets de fetge fins que quedi una mescla
homogenia.(intervals de 10s)per tal de trencar les cel·lules.
4.
Agafem un vas de presipitats net i hi afegim 5ml
de la méscla que hem aconseguit triturant el fetge i 10ml de la solució tampó i
reguiraro, colar la mescla amb l'ajuda d'una gassa.
5.
Agafem 5ml del caldo molecular i afegim 10ml
d'alcohol isoamílic refredat fins a 0ºC. Per tal d'obtenir l'efecte desitjat
hem de deixar escorre lentament l'alcohol per la cara interna del tub d'assaig.
L'alcohol quedara surant sobre la mescla.
6.
Agafem una bareta de vidre i la introduim fins
just on hi ha la separació dels 2 compotos, i removem suaument fins que una
quedi enganxat a la bareta una mica de producte que té un espercet blanquinós.
7.
Deixem el material sobre un “porta” i afeguim una
gota de tint per tal de veure-les millor al microscopi, el recobrim amb un
“cubre” i obserbem al microscopi.
CONCLUSIONS
Al microsopi hem pogut obserbar
cromosomes. Però no pur, ja que podem trobar trossos d'ARN
barrejats. Amb un mètode professional els errors són mínims, fem servir un
instrumental especialitzat i exacte, a part que l'ADN que s'observa és 100%
pur.
